省卫生厅关于2004年度全省卫生监督抽检与专项卫生监督检查工作计划中公共场所卫生监督抽查有关问题的补充通知
苏卫法监〔2004〕22号
各市卫生局，省卫生监督所、疾病预防控制中心：
根据卫生部卫生法制与监督司近期召开的《公共场所集中空调通风系统卫生规范》宣贯会议的有关精神，现对《省卫生厅关于下发2004年度全省卫生监督抽检与专项卫生监督检查工作计划的通知》（苏卫法监[2004]11号）中“公共场所集中空调通风系统卫生监督抽查”中有关空调通风系统积尘采样及检验分析方法、抽检汇总表的填报等作以下补充说明：
一、检查对象
各市随机抽查辖区内带有集中空调通风系统的宾馆饭店（三星级以上）和大型商场（包括超市）不少于3家。
二、检查方法
1、根据《公共场所卫生管理条例》、《公共场所集中空调通风系统卫生规范》（苏卫法监[2003]84号文转发）、《公共场所卫生标准监测检验方法》，组织开展公共场所集中空调通风系统卫生监督抽查工作。
2、空调通风系统积尘采样及检验分析方法技术指南见附件1 。
3、公共场所集中空调通风系统抽检汇总表及填表说明见附件2。
三、上报时间
仍按苏卫法监[2004]11号规定的上报时间上报，即在2004年4月1日前将公共场所集中空调通风系统卫生监督抽检工作总结、汇总表及数据文件按本文的要求报省卫生监督所，以便汇总报卫生部。联系地址：南京市江苏路172号，邮编：210009，电话（传真）：025-83231121，联系人：董蔚。
四、其他未尽事宜，请径与省卫生监督所联系。
附件：
1、空调通风系统积尘采样及检验分析方法技术指南
2、公共场所集中空调通风系统抽检汇总表及填表说明
江苏省卫生厅
二○○四年三月十八日
附件1 空调通风系统积尘采样及检验分析方法技术指南
一、空调风管积尘采样方法
(一)积尘样品采集数量与样品量
1、采集的每个样品中灰尘重量大于0.5克；
2、每个公共场所采集送风管不同采样断面的3个积尘样品，或者采集9个不同风口的积尘样品。
(二)采样位置的确定
1、凡是空调系统送风主管道已经预留检修人孔，可以采集到风管内部积尘的，均应将采样位置确定在送风主管道。
2、如果空调系统送风主管道没有预留检修人孔，可将采样位置确定在房间风口。在选定检测的空调系统服务区域内（如一个楼层）随机抽取9个风口进行采样，采样位置确定在房间回风口，若无回风口，应确定在送风口。
(三)采样器材与采样准备
1、器材：正方形擦拭取样框（材质最好为金属不锈钢的取样框），内部为边长100×100毫米和200×200毫米2种;无纺布;密封式塑料袋;称量天平,精度0.01克;一次性塑料手套。
2、准备：将无纺布裁成100×100毫米和200×200毫米2种正方形布块；每2片放入一个密封塑料代中为一套；将每套无纺布在实验室环境中存放一天；将每套无纺布进行编号，用天平称量2次，取其平均值为擦拭前的重量（初重）。
3、取样
在送风主管道取样时，关闭此套空调机组。在风口取样时，关闭该风口的送风；
打开主管道上的检修人孔或拆下风口的散流器；
根据风管断面的大小选择取样框，并将取样框放在风管的底面上；
戴上一次性塑料手套，用2片无纺布将取样框内风管内壁上的灰尘擦拭干净，如果需要再用2片，直到擦拭干净为止；如果灰尘量不足0.5克,可继续使用同一块布擦拭风管2个侧面；
将取样后的无纺布放回原密封袋中保管,并记录采样信息（采样人、采样日期、公共场所名称、采样位置、取样框大小、无纺布编号等）。
二、空调风管积尘量、积尘中细菌总数和真菌总数的检验分析方法
(一)风管积尘量分析
1、将取样后密封好的各套无纺布在天平上称量2次，取平均值为终重；
2、如果每个采样断面使用1套无纺布擦拭，各套无纺布终重与初重之差为该检测断面的风管积尘重量；如果一个取样框使用了2套，应将相应的增重相加为该检测断面的风管积尘重量；如果使用1套无纺布擦拭了多个取样框，应将增重除以擦拭取样框的个数后为该检测断面的风管积尘重量；
3、将每个检测断面积尘重量换算成每平方米风管内表面的积尘量，即使用100×100毫米的取样框，检测断面积尘量乘以100；使用200×200毫米的取样框，检测断面积尘量乘以25；
4、取3个风管积尘量的平均值或9个风口风管积尘量的平均值作为该公共场所集中空调系统风管积尘量的检测结果，以g/m2表示。
(二)积尘中细菌总数的分析方法
1、采样与样品处理
积尘中细菌总数和真菌总数样品应在积尘采样位置使用取样框单独采集。
当取样框内的风管表面积尘重量大于0.5g时，将灰尘采集到无菌袋中，采用直接灰尘培养法。将采集的灰尘样品直接悬浮于PBS或生理盐水溶液中，然后用洗脱液涂布琼脂平板，培养与计数菌落形成单位以供分析。
当灰尘量不足时，采用棉拭法，选择布、棉花或其他材料，用灭菌盐水润湿，通过擦拭采集通风管道表面的微生物，然后在同样的（灭菌盐水）溶液洗脱微生物，涂平板培养，并计数菌落形成单位以供分析，涂板方法可用湿拭子直接涂布，也可以用洗脱液涂布。
2、分析方法
应用营养琼脂培养基，37±2℃培养48±4小时，观查并记录所形成的菌落数（37℃培养24h时应进行观查，不必记录结果）。
营养琼脂培养基制备：
成份：蛋白胨 10g
氯化钠 5g
肉膏 5g
琼脂 20g
蒸馏水 1000ml
制法：将上述成分加热溶化于蒸馏水中，校正pH值为7.4-7.6。加入琼脂，121℃20min灭菌。
含0.01%Tween-80的0.03mol/L PBS的制备：（pH=7.2）
成分：磷酸氢二钠 2.83g
磷酸二氢钾 1.36g
蒸馏水 至990ml
Tween-80 最终浓度0.01%
制法：将磷酸氢二钠、磷酸二氢钾溶于少量蒸馏水中，溶解混匀加水至990ml，按比例加入1%Tween-80液10ml,使最终浓度0.01%，121℃蒸汽灭菌20min。
3、结果计算
根据风管内积尘样品的重量及微生物培养时所取的灰尘量，将菌落数换算为每克灰尘中的细菌总数，以cfu/g表示。
(三)积尘中真菌总数的分析方法
1、样品前处理：与细菌总数检测时的样品前处理方法相同
2、分析方法
应用沙氏琼脂培养基，28±2℃培养5-7d，逐日观查并于第7日记录结果（如培养至5日时，霉菌或放线菌的菌丝生长掩盖周围菌落或菌丝长至满皿，可停止观查并记录结果，但在报告时需注明）。
沙氏琼脂培养基制备：
成份：蛋白胨 10g
葡萄糖 40g
琼脂 20g
蒸馏水 1000ml
制法：将蛋白胨、葡萄糖溶解于蒸馏水中，校正pH值为5.5-6.0,加入琼脂，115℃15min灭菌备用。
附：此培养基是国际上培养真菌的标准培养基，应用广泛。培养基的pH值为5.5-6.0，除真菌外一般菌不易在此酸性培养基中生长，在配制时一般不需调整pH，其值即与此接近。需注意琼脂在酸性条件下多次加热，琼脂的凝固性会降低或丧失。为抑制细菌与放线菌的生长，可在1L沙氏琼脂培养基中加入40-50mg氯霉素和500mg放线菌酮，两种抗菌素均耐热，在高压蒸汽灭菌前加入。
含0.01%Tween-80的自来水稀释液制备：在自来水中加入Tween-80,使最终浓度0.01%，121℃20min灭菌备用。
3、结果计算
根据风管积尘样品的重量及微生物培养时所取的灰尘量，将菌落数换算为每克灰尘中的真菌总数，以cfu/g表示。
附件2 公共场所集中空调通风系统抽检汇总表及填表说明
一、公共场所集中空调通风系统抽检汇总表
二、填表说明
1、抽检户数：每个场所计作一户，总共不应少于3户。
2、检测样品数：指空调送风主管内取出的积尘样品数量，每个公共场所送风主管样品数应不少于3个或者送风口取样不少于9个；将每一类抽检的全部公共场所样品数相加后，即为检测样品数；
3、风管积尘量：指每平方米风管内表面积的积尘重量，每个公共场所空调系统风管的积尘样品的均值作为一个数据；
4、细菌总数、真菌总数：指每克风管积尘中的细菌和真菌总数；
5、污染程度：根据每个公共场所空调风管积尘量、细菌总数、真菌总数的检测结果，将空调严重、中等、轻度污染的公共场所个数填入相应栏目中。只要有任何一项指标达到严重、中等、轻度三种污染程度中的一种，即判定为该种污染程度。
6、备注：写明每一户公共场所空调风管积尘的采样位置，即注明送风管、送风口或回风口采样。
7、本次抽检中各采样点的检测数据如风管积尘量(g/m2)、细菌和真菌总数(cfu/g)应分别填写, 与公共场所集中空调通风系统抽检汇总表一并上报。风管积尘量、细菌和真菌总数检测数据结果填报样式。
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